各位看看我的引物酶切位点和保护碱基有什么问题吗5’-CCTGAATTCATGGCTAGCCTTCTCA-3’5’-CCGCTCGAGTATTTA ATTGAATAGTT-3’

各位看看我的引物酶切位点和保护碱基有什么问题吗5’-CCTGAATTCATGGCTAGCCTTCTCA-3’5’-CCGCTCGAGTATTTA ATTGAATAGTT-3’ 请教各位我设计引物加了酶切位点和六个保护碱基,结果扩出来的片段短了,缺少我之前设计引物那段互补片段请教各位我设计引物能扩增出目的片段,测序结果正确,设计表达引物直接在上面加 rsrii酶切位点的保护碱基是什么啊?有哪位高人知道rsrii这个酶切位点的保护碱基是什么啊?我最近要设计引物用到这个酶切位点的,可查不到它的保护碱基, PCR引物设计不好,如何提高引物特异性?设计的PCR引物都是80多分的样子,但是一旦加上酶切位点和保护碱基以后,引物的特异性就变得特别差,如何解决这种问题,有没有什么设计引物的技巧呢? 设计引物的时候,酶切位点的前面的保护碱基应该怎么加,遵循什么原则. 为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀?还有,好多的Tm值都代表什么呢?引物Tm60多,二级结构的Tm达到40度有关系吗?G值有什么用 PCR时引物的概念包括加进去的酶切位点和保护碱基嘛?算进引物的长度吗?一块分析嘛?我设计的下游引物只有15个碱基,但primer5上的长度18个,如果我删去三个就不配对了（只是下游引物）,影响 我从PMD18-T上克隆目的基因,用的是Ecor I 和Not I酶切位点,引物Not I只有一个保护碱基,这样可以吗? 引物18个碱基互补序列,Tm值60左右,加上酶切位点和保护碱基后,Tm值就72了,这么高Tm行吗?能帮我看下,这样设计的引物对吗ATGC TCTAGA GC TCAGATGTCCACGTCCCG前面四个和第11、12个（GC）是保护碱基,中间6 带酶切位点的引物设计问题带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, PCR过程中引物的碱基数量与种类 和 退火温度有什么关系?理由 引物不含保护碱基,PCR扩增结果有什么影响 设计的引物19个碱基,其中包括6 bp的酶切位点和3个保护碱基,和模板配对的只有11个碱基,是不是太短?该引物用于基因.19个碱基的引物是不是肯定不能扩增出目的基因? 引物加了保护碱基和酶切位点（共14个碱基）后退火温度需要调整吗? 有关PCR引物设计好像引物设计好以后,还要添加什么保护碱基,有时还要添加酶切位点,这些东西添加进去后,不是无法和模板链连接起来了吗?除非是把引物设计的所有要求统一起来,在模板链上 带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, 酶切位点与保护碱基加入如果有ATG怎么办?我克隆一个完整的CDS,有ATG,设计的引物上游直接以ATG开始,而下游直接以TTA开始（与TAA互补）,那么上游加入酶切位点与保护碱基时,如果有ATG怎么办? 做克隆时,请问在引物前加的一段保护碱基和内切酶序列需要和cDNA互补吗?