设计引物的时候,酶切位点的前面的保护碱基应该怎么加,遵循什么原则.

设计引物的时候,酶切位点的前面的保护碱基应该怎么加,遵循什么原则. 引物18个碱基互补序列,Tm值60左右,加上酶切位点和保护碱基后,Tm值就72了,这么高Tm行吗?能帮我看下,这样设计的引物对吗ATGC TCTAGA GC TCAGATGTCCACGTCCCG前面四个和第11、12个（GC）是保护碱基,中间6 rsrii酶切位点的保护碱基是什么啊?有哪位高人知道rsrii这个酶切位点的保护碱基是什么啊?我最近要设计引物用到这个酶切位点的,可查不到它的保护碱基, 设计的引物19个碱基,其中包括6 bp的酶切位点和3个保护碱基,和模板配对的只有11个碱基,是不是太短?该引物用于基因.19个碱基的引物是不是肯定不能扩增出目的基因? PCR引物设计不好,如何提高引物特异性?设计的PCR引物都是80多分的样子,但是一旦加上酶切位点和保护碱基以后,引物的特异性就变得特别差,如何解决这种问题,有没有什么设计引物的技巧呢? 请教各位我设计引物加了酶切位点和六个保护碱基,结果扩出来的片段短了,缺少我之前设计引物那段互补片段请教各位我设计引物能扩增出目的片段,测序结果正确,设计表达引物直接在上面加 PCR时引物的概念包括加进去的酶切位点和保护碱基嘛?算进引物的长度吗?一块分析嘛?我设计的下游引物只有15个碱基,但primer5上的长度18个,如果我删去三个就不配对了（只是下游引物）,影响 带酶切位点的引物设计问题带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, 设计引物的时候为什么先设计一对引物,再加上酶切位点后设计一对,为什么不直接加上酶切位点设计引物呢? 有关PCR引物设计好像引物设计好以后,还要添加什么保护碱基,有时还要添加酶切位点,这些东西添加进去后,不是无法和模板链连接起来了吗?除非是把引物设计的所有要求统一起来,在模板链上 各位看看我的引物酶切位点和保护碱基有什么问题吗5’-CCTGAATTCATGGCTAGCCTTCTCA-3’5’-CCGCTCGAGTATTTA ATTGAATAGTT-3’ 为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀?还有,好多的Tm值都代表什么呢?引物Tm60多,二级结构的Tm达到40度有关系吗?G值有什么用 克隆设计引物插入酶切位点的问题我要对真菌的全序列进行克隆,设计引物时是不是讲酶切位点插入到5’端就可以了?加的保护基团在酶切位点之前加就可以吗,它是随便的三个碱基吗?限制性 引物二聚体 在设计的时候 是不可避免的么? 引物二聚体 在设计的时候 是不可避免的么? 酶切位点与保护碱基加入如果有ATG怎么办?我克隆一个完整的CDS,有ATG,设计的引物上游直接以ATG开始,而下游直接以TTA开始（与TAA互补）,那么上游加入酶切位点与保护碱基时,如果有ATG怎么办? PCR引物设计问题我是要扩增一个片段,加上双酶切位点,片段就那么大,我就需要那么大加酶切位点?这引物怎么设计?是不是只要5‘端序列,以及3’端的反向互补序列加上酶切位点和保护碱基就 克隆2500个碱基,该设计多长的引物呢?我准备克隆2500个碱基,引物是不是应该长一点?