PCR扩增退火温度确定引物F:SIZE:20 TM56.9 %GC:55引物R:size:29 TM67 %GC:55根据TM=4*(G+C)+2(A+T)-5它的退火温度是多少?本人小菜鸟一枚,请教高手,主要是不懂从订单上怎么确定G+C及A+T的含量?我知道有
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/20 19:13:00
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PCR扩增退火温度确定
引物F:SIZE:20 TM56.9 %GC:55
引物R:size:29 TM67 %GC:55
根据TM=4*(G+C)+2(A+T)-5它的退火温度是多少?
本人小菜鸟一枚,请教高手,主要是不懂从订单上怎么确定G+C及A+T的含量?
我知道有软件可以计算,我只是想搞搞清楚根据上面的公式怎么算?还有从哪里得知G+C及A+T的含量?是订单上给的%GC就是G+C的值吗?还有A+T的含量怎么计算?
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计算退火温度的方法:
1. 退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8) 只是粗算,有时不灵,但比较简便.
2.用primer5(or oligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2 or 3度最好.
3.合成引物的单子上也有个Tm,减去5~8也可,但有些公司提供的Tm就是方法1计算的.
1、软件预算
2、利用梯度PCR优化退火温度
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