求分离,纯化,鉴定γ球蛋白的具体方法（包括原理,预期结果,注意事项）谢谢

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/29 05:34:50

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[原理]
血清中蛋白质按电泳法一般可分为五类：清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白,其中γ-球蛋白含量约占16％,100ml血清中约含1.2g左右.
首先利用清蛋白和球蛋白在高浓度中性盐溶液中(常用硫酸铵)溶解度的差异而进行沉淀分离,此为盐析法.半饱和硫酸铵溶液可使球蛋白沉淀析出,清蛋白则仍溶解在溶液中,经离心分离,沉淀部分即为含有γ-球蛋白的粗制品.
用盐析法分离而得的蛋白质中含有大量的中性盐,会妨碍蛋白质进一步纯化,因此首先必须去除.常用的方法有透析法、凝胶层析法等.本实验采用凝胶层析法,其目的是利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异.当溶液通过SephadexG--25凝胶柱时,溶液中分子直径大的蛋白质不能进入凝胶颗粒的网孔,而分子直径小的无机盐能进入凝胶颗粒的网孔之中．因此在洗脱过程中,小分子的盐会被阻滞而后洗脱出来,从而可达到去盐的目的.
脱盐后的蛋白质溶液尚含有各种球蛋白,利用它们等电点的不同可进行分离.α－球蛋白、β-球蛋白的PI4为止.加等体积lmol/L氢氧化钠溶液,使最终浓度约为0.5mol/L氢氧化钠,搅拌后放置30min,以虹吸除去上层液体.同上用蒸馏水反复洗至pH

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