作业帮用pmd-18t载体克隆基因,能用M13测序吗要克隆基因,用的是TAKARA的PMD-18T载体,可以用M13测序吗?克隆基因最后这几步具体怎么做,
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/13 07:32:31
用pmd-18t载体克隆基因,能用M13测序吗要克隆基因,用的是TAKARA的PMD-18T载体,可以用M13测序吗?克隆基因最后这几步具体怎么做,
用pmd-18t载体克隆基因,能用M13测序吗
要克隆基因,用的是TAKARA的PMD-18T载体,可以用M13测序吗?克隆基因最后这几步具体怎么做,
用pmd-18t载体克隆基因,能用M13测序吗要克隆基因,用的是TAKARA的PMD-18T载体,可以用M13测序吗?克隆基因最后这几步具体怎么做,
可以
制品说明
pMD18-T Vector、pMD19-T Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体.这两种载体分别由 pUC18、pUC19载体改建而成,在pUC18、pUC19载体的多克隆位点处的Xba I和Sal I识别位点之间插入了EcoR V识别位点,用 EcoR V进行酶切反应后,再在两侧的3'端添加 "T" 而成.因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的3'末端添加一个 "A" 的特性,所以使用这两种制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率.
由于这两种载体是分别以pUC18、pUC19载体为基础构建而成,所以它具有同pUC18、pUC19载体相同的功能.此外,这两种制品中的高效连接液 Ligation Mix可以在极短时间内 (约5分钟) 完成连接反应,且此连接液可以直接用于细菌转化,大大方便了实验操作.制品中的 Control Insert (500 bp) 还可以用于Control反应.
pMD19-T Vector与pMD18-T Vector相比,pMD19-T Vector的b-半乳糖苷酶的表达活性更高,菌落显示蓝色的时间缩短,菌落显示的蓝色更深.因此,克隆后更容易进行克隆体的蓝白筛选.
纯度
Control Insert经克隆后的白色菌落中,有90%以上含有Insert DNA片段.
Control Insert经克隆后,用双脱氧测序法确认多克隆酶切位点及T碱基的存在.
用途
进行TA克隆,克隆PCR产物.
对克隆后的PCR产物使用BcaBESTTM Sequencing Primers、M13 Primers进行DNA测序.